產品名稱:人逆轉錄病毒包裝細胞系Plat-E

人逆轉錄病毒包裝細胞系Plat-E收到貨后處理

細胞在培養瓶中培養至良好狀態后灌滿培養液并封好瓶口是細胞運輸的辦法。收到細胞回到自己的實驗室后，先打開外包裝，用75%酒精噴灑整個瓶消毒后放到超凈臺內，嚴格無菌操作，培養箱靜置2-4小時。鏡下觀察：未超過80%匯合度時，可將瓶裝的培養液收集至離心管中，加入6ml培養基，放入37℃、5%CO2孵箱培養；超過80%匯合度時，根據情況傳代或者凍存，具體操作見細胞培養步驟。（注意發貨的是密封培養瓶的話，放入培養箱培養記得培養瓶蓋子擰松，傳代后建議一瓶用原瓶里面的培養基，另外一瓶用自己配的培養基）

人逆轉錄病毒包裝細胞系Plat-E培養步驟

一、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入5mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加4-6mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入6cm皿中），培養過夜。第二天換液并檢查細胞密度。

二、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。

a）、對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：

1. 棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2min，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加5ml以上含10%血清的培養基終止消化。

3.輕輕吹打細胞，脫落后吸出，在1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。

4. 按5-6ml/瓶補加培養液，將細胞懸液按1：2的比例分到新的含5-6 ml培養液的新皿中或者瓶中。

b）、對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：

方法一：收集細胞，1000RPM條件下離心8-10分鐘，棄上清液，補加1-2ml培養液后吹勻，將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或瓶中。

方法二：可選擇半數換液方式，棄半數培養基后，將剩余細胞懸起，將細胞懸液按1:2到1:3的比例分到新的含8ml培養基新皿中或者瓶中。

PS：若客戶收到2ml小管細胞，收到細胞后，用75%酒精噴灑整個管子消毒后放到超凈臺或安全柜內，嚴格無菌操作；將小管細胞轉移至T25培養瓶或6cm培養皿，加入5ml左右培養基混勻，放入培養箱過夜培養后查看細胞密度：若密度未超過80%，換液繼續培養，視情況傳代或者凍存。若密度超過80%，可直接進行傳代（方法同上）。

三、細胞凍存：（注：無血清凍存液凍存細胞的方法請參考我司貨號：C7001）

1、細胞生長至覆蓋培養瓶的80%面積時，棄25cm2培養瓶中的培養液，用PBS清洗細胞一次；

2、添加0.25%消化液約1ml至培養瓶中，倒置顯微鏡下觀察，待細胞回縮變圓后加入培養液終止消化，輕輕吹打細胞使之脫落，然后將懸液轉移至15ml離心管中，1000rpm離心5min；

3、用適量的凍存液重懸細胞，并放置于凍存管中；

4、先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h，然后將其移入-80℃

人逆轉錄病毒包裝細胞系Plat-E部分產品：

YS3461CCRFS180II小鼠肉瘤成纖維細胞CCRFS180II

YS3462351小鼠雜交瘤細胞抗CD235.1

YS3463FreestyleCHOS中國倉鼠卵巢細胞Freestyle CHO-S

YS3464SH2小鼠B淋巴細胞白血病SH2

YS3465H1Hela人宮頸癌細胞H1 Hela

YS3466IPECJ2豬正常的腸上皮細胞IPEC-J2

YS3467CHO/DHFR中國倉鼠卵巢細胞CHO/DHFR

YS3468MEL（MEL745AclDS19）小鼠紅白血病細胞MEL（MEL-745A cl. DS19）

YS3469JAWSⅡ小鼠骨髓（未成熟）樹突狀細胞JAWSⅡ

YS3470ZFL斑馬魚肝臟組織細胞ZFL

YS3471GM12882人B淋巴細胞GM12882

YS3472GM01176人成纖維細胞GM01176

YS3473GM50142人B淋巴細胞GM50142

YS3474GM50113人B淋巴細胞GM50113

YS3475GM11404人B淋巴細胞GM11404

YS3476GM23465人B淋巴細胞GM23465

YS3477GM01359人成纖維細胞GM01359

YS3478AG09802人B淋巴細胞AG09802

YS3479GM21833人B淋巴細胞GM21833

YS3480VK2/E6E7人陰道粘膜上皮細胞VK2/E6E7

YS3481GM02008人成纖維細胞GM02008

YS3482GM11115人成纖維細胞GM11115

YS3483GM13325人成纖維細胞GM13325

YS3484GM09326人成纖維細胞GM09326

YS3485GM00526人成纖維細胞GM00526

YS3486GM50152人B淋巴細胞GM50152

YS3487H197/IGFIR褐家鼠腦海馬體成纖維細胞H19-7/IGF-IR

YS3490EO771小鼠髓樣乳腺癌貼壁細胞EO771

YS3491GM03606唐氏綜合癥背景羊水來源細胞GM03606

YS3492BB71小鼠（骨髓瘤）雜交瘤細胞BB7.1

YS3493BBM1小鼠（骨髓瘤）雜交瘤細胞BBM.1

YS3494L243小鼠（骨髓瘤）雜交瘤細胞L243

YS34954.00E+11小鼠（骨髓瘤）雜交瘤細胞4E11

YS3496BB77小鼠（骨髓瘤）雜交瘤細胞BB7.7

YS3497IGG6A6小鼠（骨髓瘤）雜交瘤細胞IGG-6A6

YS349893F10小鼠（骨髓瘤）雜交瘤細胞9.3F10

YS3499NEGFP4C小鼠神經干細胞NE-GFP-4C

YS3500GM00325人成纖維細胞GM00325

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